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技術(shù)文章/ Technical Articles

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  • 2024

    7-25

    本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷植物(Plant)甘ān酸甜菜堿(GB)ELISA檢測(cè)試劑盒使用說明書檢測(cè)原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被甘ān酸甜菜堿(GB)抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過溫育并chè底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的甘ān酸甜菜堿(GB)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值...

  • 2024

    7-3

    PCR引物設(shè)計(jì)的十個(gè)基本原則:1、引物zuì好在模板cDNA的保守區(qū)內(nèi)設(shè)計(jì):DNA序列的保守區(qū)是通過物種間相似序列的比較確定的。搜索不同物種的同一基因,通過序列分析軟件比對(duì),各基因相同的序列就是該基因的保守區(qū)。2、引物長(zhǎng)度一般在15~30堿基之間:引物長(zhǎng)度(primerlength)常用的是18-27bp,但不應(yīng)大于38,因?yàn)檫^長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致其延伸溫度大于74℃,不適于TaqDNA聚合酶進(jìn)行反應(yīng)。3、引物GC含量在40%~60%之間,Tm值z(mì)uì好接近72℃:上下游引物的Tm值是寡...

  • 2024

    6-27

    循環(huán)次數(shù):一般為25a~30次。循環(huán)數(shù)決定PCR擴(kuò)增的產(chǎn)量。模板初始濃度低,可增加循環(huán)數(shù)以便達(dá)到有效的擴(kuò)增量。但循環(huán)數(shù)并不是可以無限增加的。一般循環(huán)數(shù)為30個(gè)左右,循環(huán)數(shù)超過30個(gè)以后,DNA聚合酶活性逐漸達(dá)到飽和,產(chǎn)物的量不再隨循環(huán)數(shù)的增加而增加,出現(xiàn)了所謂的“平臺(tái)期"。循環(huán)參數(shù)如下:1.預(yù)變性模板DNA*變性與PCR酶的*激活對(duì)PCR能否成功至關(guān)重要,建議加熱時(shí)間參考試劑說明書,一般未修飾的Taq酶激活時(shí)間為兩分鐘。2.變性步驟循環(huán)中一般95℃,30秒足以使各種靶DNA序...

  • 2024

    6-26

    樣品采集:1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)使用方法:1.注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)...

  • 2024

    6-24

    試驗(yàn)結(jié)果空白背景高,這是什么原因造成的?試驗(yàn)結(jié)果空白背景高,常見原因如下:a)可能原因:洗板不干凈;解決方法:充分洗滌,che底拍干;洗板要防止交叉污染;濃縮洗液準(zhǔn)確配制;吸嘴盡可能一次性使用;加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用,不要反復(fù)使用,否則易造成污染。b)可能原因:顯色液變質(zhì)或者試劑過期;解決方法:檢查試劑盒有效期。c)可能原因:試劑稀釋有誤,如加酶的濃度過高;解決方法:請(qǐng)按說明書所示稀釋倍數(shù)配制;d)可能原因:蒸餾水受酶等污染;解決方法:使用新鮮蒸餾水;e)可能原因:試...

  • 2024

    6-21

    ELISA試劑盒的五大種類:一、生物原裝ELISA試劑盒以及各類國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒、細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒如白介素、選擇素、集落刺激因子,腫瘤壞死因子,干擾素,轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子,趨化因子,細(xì)胞因子受體,粘附分子,生長(zhǎng)因子,凋亡因子等。二、食品安全檢驗(yàn)ELISA試劑盒指食品中的激素、藥物、霉菌毒素、過敏原殘留、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測(cè)試劑盒,以及微生物、維生素等的檢測(cè)產(chǎn)品。包括植物病毒、細(xì)菌、真菌、植物激素和轉(zhuǎn)基因作物的農(nóng)業(yè)診斷試劑盒,以及動(dòng)植物疾病診斷類如豬、牛、羊、馬等家畜和禽類以及寵物...

  • 2024

    6-20

    人間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)條件:1、合適的小鼠源細(xì)胞培養(yǎng)基是體外細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的重要的條件之一,培養(yǎng)基不僅提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),而且還提供培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。2、優(yōu)質(zhì)血清目前,大多數(shù)合成培養(yǎng)基都需要添加血清。血清是細(xì)胞培養(yǎng)液中重要的成分之一,含有細(xì)胞生長(zhǎng)所需的多種生長(zhǎng)因子及其它營(yíng)養(yǎng)成分。3、無菌無毒細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境無菌無毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細(xì)胞在體外培養(yǎng)成功的首要條件。在體外培養(yǎng)的細(xì)胞由于缺乏對(duì)微生物和有毒物的防御能力,一旦被微生物或有毒物...

  • 2024

    6-20

    聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(Polymerasechainraction,PCR)是一種在體外擴(kuò)增特定DNA片段的方法,具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn),可用很短時(shí)間使目的基因或某一片段擴(kuò)增十萬乃至幾百萬倍。PCR反應(yīng)基本步驟:1、變性:根據(jù)DNA高溫變性的原理,將反應(yīng)體系溫度升至變性溫度(高于模板熔點(diǎn),約95℃),使目的DNA雙鏈裂解成PCR模板(單鏈)。[95℃,30s]2、退火:將反應(yīng)體系溫度驟降至退火溫度(低于引物熔點(diǎn)約55℃),是PCR引物與P...

  • 2024

    6-20

    影響抗原抗體反應(yīng)的兩個(gè)因素:1、反應(yīng)物自身的因素抗體:不同來源的抗體,反應(yīng)性各有差異,抗體的濃度、特異性和親和力都影響抗體抗原反應(yīng),為提高試驗(yàn)的可靠性,應(yīng)選擇高特異性、高親和力的抗體作診斷試劑.等價(jià)帶的寬窄也影響抗原抗體復(fù)合物的形成,單克隆抗體不適用于沉淀反應(yīng).抗原:抗原的理化性狀、分子量、抗原決定簇的種類及數(shù)目均可影響反應(yīng)結(jié)果.顆粒性抗原出現(xiàn)凝集反應(yīng),可溶性抗原出現(xiàn)沉淀反應(yīng),單價(jià)抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象.2、反應(yīng)環(huán)境條件酸堿度:抗原抗體反應(yīng)必須在合適的pH環(huán)境中進(jìn)行...

  • 2024

    6-14

    在培養(yǎng)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中,難免培養(yǎng)的細(xì)胞被污染了,得不到想要的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,那么你知道細(xì)胞培養(yǎng)的污染來源有哪些嗎?細(xì)胞培養(yǎng)過程中污染的來源主要有以下幾條途徑:一、不潔的動(dòng)物組織標(biāo)本很多動(dòng)物組織本該是無菌的(直接與外界相通的呼吸道和消化道、泌尿系統(tǒng)除外),但由于取材時(shí)不小心也會(huì)有污染的機(jī)會(huì)。組織本身含有細(xì)菌,如取材時(shí)不用濃的抗生素洗液洗滌浸泡,也會(huì)帶菌,造成細(xì)胞污染。二、空氣空氣中含有大量的微生物,如果操作室與外界隔離不嚴(yán)或消毒不充分下,很容易造成污染。另外,凈化工作臺(tái)使用過久,濾板未定...

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