大鼠丙酮酸激酶(PK)ELISA試劑盒

檢測(cè)方法：酶聯(lián)免疫法

品牌：佰利萊

標(biāo)記物：HRP標(biāo)記物

應(yīng)用：定性/定量/酶活檢測(cè)

貯藏條件：2-8℃

有效期：6個(gè)月

標(biāo)本：血清、血漿、組織液、組織勻漿等

一、組織勻漿的制備

1、取組織塊（0.1g～0.5g）最少可到5～10mg在冰冷的PBS中漂洗，濾紙拭干，準(zhǔn)確稱(chēng)重，放入5ml的勻漿管中。

2、按重量(g):體積(ml)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)于勻漿管中，冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊。

3、勻漿的方式：手工勻漿，機(jī)器勻漿。

① 手工勻漿：左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次（6～8分鐘），充分研碎，制成10%的勻漿液。

② 機(jī)器勻漿：用組織搗碎機(jī)10000～15000 轉(zhuǎn)/分 上下研磨制成10%組織勻漿，也可用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制備（勻漿時(shí)間10秒/次，間隙30秒，連續(xù)3～5次，在冰水中進(jìn)行,可適當(dāng)延長(zhǎng)勻漿時(shí)間），鏡檢觀察:

4、將制備好的10%勻漿液用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)3000轉(zhuǎn)/分左右,離心10～15分鐘，取上清液進(jìn)行測(cè)定.

二、勻漿介質(zhì)  一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶(hù)可根據(jù)樣本及測(cè)定指標(biāo)的情況自行設(shè)定濃度,目的是保持樣本的等滲環(huán)境。

三、樣本保存:

植物組織樣本暫時(shí)不測(cè)定，可立即低溫凍存，溫度越低越好，中間如反復(fù)凍融，-20℃以下可保 存三個(gè)月,-70℃以下可保存六個(gè)月

試劑準(zhǔn)備：

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

1.標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶：試劑盒提供6管標(biāo)準(zhǔn)品，每管已標(biāo)定濃度，并且凍干。實(shí)驗(yàn)前在每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品管中加入0.5mL稀釋液，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)助其溶解，使其恢復(fù)為每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品管身標(biāo)注的濃度。

2. 20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20稀釋?zhuān)?份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

試劑盒自備材料：

1）蒸餾水。

2）加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3）振蕩器及磁力攪拌器等。

大鼠丙酮酸激酶(PK)ELISA試劑盒

細(xì)胞樣品前處理：

a)對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

b)對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬(wàn)細(xì)胞/管，然后再裂解。

c)對(duì)于組織樣品： 把組織剪切成細(xì)小的碎片。按照每20mg組織加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。

用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

2、后處理：

將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的ELISA、Western和免疫沉淀等操作。

免責(zé)聲明：

1.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。

2.   嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。

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